大多数培养基需要在121℃下高压灭菌15-30分钟，只有少数介质需要加热溶解而不需要高压灭菌。特别是无菌试验中培养基灭菌不彻底直接关系到检测结果。因此，有必要对高压灭菌器的灭菌效果进行验证。
1试验数据
（1）嗜热脂肪芽孢杆菌圆盘。嗜热脂肪芽孢杆菌atcc7053是该方法常用的生物指示剂，其孢子大小为5-l05 CFU/片。
（2） 121℃压力蒸汽灭菌化学指示卡。
（3） 溴甲酚紫蛋白胨水培养基在116℃灭菌20min后使用。
（4） 0-150℃保温温度计。
2方法与结果
用无菌镊子将嗜热脂肪芽孢杆菌圆盘（以下简称菌片）放入密封试管中。将化学指示卡和保留温度计放入开口管中。制备5-10份上述两种试管。单独放置在高压灭菌器蒸气口、底部排气口和底部出水处，或上下左右各5个中心。如果高压灭菌器为两层，应放置在10处。
保留点温度计应经标准化合格后方可用于检定试验。测试前，温度计的水银柱应在40℃以下摇晃。每次监测后，温度计的温差应保持在1℃之间，说明高压灭菌器内温度分布均匀。
灭菌片应置于灭菌的溴甲酚紫蛋白胨水介质中，严格无菌操作条件，在56～60℃下培养24～48h，观察颜色变化。如果培养基变黄，说明平板中的嗜热脂肪芽孢杆菌尚未完全灭活，细菌仍能在培养基中生长，分化为葡萄糖，产酸变黄。如果培养基的基本颜色仍然是紫色，说明孢子已经失活。同时，未灭菌纸应作为阳性对照放入培养基中，空白纸无纸作为阴性对照。
化学指示卡上的色块在高压灭菌时由浅黄色变为黑色。通过颜色的变化，并与对照色进行比较，判断灭菌效果是否符合要求。化学指示卡应保存在干燥的地方。遇潮变色，影响灭菌效果观察。
高压蒸汽灭菌必须使蒸汽顺利进入高压灭菌器，接触灭菌物品，排出原有冷空气。应验证空载热扩散和满载热穿透（不超过满载时总体积的2/3）。这两个试验重复三次，共六次。5个点6次试验结果表明，温度为121℃，化学指示卡变黑，程度与对照颜色一致，培养基颜色无变化，说明高压蒸汽灭菌合格。
高压灭菌器属于强制检测仪器，但强制检测只检测仪器的物理参数。因此，有必要对经过严格测试的高压灭菌器的灭菌效果进行验证。有些单位经常忽视这个重要问题。市场上销售的手提式灭菌器往往指针达到要求的温度，但灭菌物品的实际温度却不符合要求。导致灭菌不彻底，影响检测结果。培养基灭菌不彻底影响培养基的使用和结果的判断。因此，有必要对高压灭菌器的无菌效果进行验证。